Shuffle T7-B 感受态细胞的特性

背景及概述^[1]

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。Shuffle T7-B菌株为大肠杆菌BL21增强型菌株，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型，适用于T7启动子启动的蛋白表达。

特性^[1]

对氨苄青霉素，氯霉素，卡那霉素和四环素敏感，对链霉素和壮观霉素有抗性。细胞内组成型表达的二硫键异构酶DsbC不仅有利于表达蛋白形成正确的二硫键，并具有分子伴侣的功能，帮助不含二硫键的蛋白正确折叠。T7 RNA聚合酶基因整合在细菌染色体上的lac操纵子区域，基因组中无λ前噬菌体序列，具有抗T1噬菌体感染特点。Shuffle T7-B感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率大于10的6次方cfu/μg DNA。

产品储存^[1]

-70℃保存，避免反复冻融。

基因型^[1]

fhuA2lacZ::T7gene1[lon]ompTahpCgalλatt::pNEB3-r1-cDsbC(SpecRlacIq)ΔtrxBsulA11R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor ∆(mcrC-mrr)114::IS10

操作说明^[1]

1.取100μl冰上融化的Shuffle T7-B 感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

主要参考资料

[1] Shuffle T7-B 感受态细胞说明书