人肺癌细胞系A549的相关研究

背景及概述^[1]

人肺癌细胞系A549是1972年由GiardDJ通过肺癌组织移植培养建系的，源自一位58岁的白人男性。人肺癌细胞系A549能通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂；角蛋白阳性。

相关研究^[1-4]

有研究探讨蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549诱导凋亡和抗增殖作用及其机制，为开发抗肿瘤新中药提供实验依据。方法应用MTT法测定蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549的生长抑制作用；通过倒置显微镜、光学显微镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学变化；采用流式细胞术检测A549细胞的凋亡率；应用免疫组织化学技术检测药物处理前后凋亡相关蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9的表达。结果(1)MTT法检测结果：蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549有明显的抑制生长的作用，且呈现出浓度的依赖性；(2)倒置显微镜观察结果：实验组肿瘤细胞体积变小、变圆，核染色质凝集，细胞间连接疏松，贴壁能力减弱；(3)HE染色观察结果：实验组肿瘤细胞体积变小、变圆，核染色质浓缩或染色质块形成，有的细胞膜起泡形成凋亡小体；(4)流式细胞术检测结果显示：蝙蝠葛提取物可以诱导A549细胞发生凋亡，加药组出现亚二倍体峰。结论(1)蝙蝠葛提取物在体外对人肺癌细胞系A549有显著的诱导凋亡作用；(2)蝙蝠葛提取物诱导凋亡作用机制可能通过上调caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白表达，经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行；(3)蝙蝠葛提取物具有显著的体外抗肿瘤作用，有望开发成一种新的抗肿瘤药物。

此外，还有研究通过应用RNAi技术沉默肺癌细胞系A549中的PEG10基因，探讨PEG10在肺癌细胞系A549细胞增殖及侵袭迁移过程中的作用。方法RPMI-1640培养肺癌A549细胞。瞬时转染及建立稳定转染shRNAPEG10细胞系；MTT及软琼脂克隆形成实验检测PEG10基因沉默对A549肺癌细胞增殖的影响；细胞划痕试验和Transwell小室方法观察PEG10基因沉默对A549肺癌细胞迁移能力的影响；逆转录RT-PCR、实时定量qRT-PCR及Westernblot检测PEG10、β-catenin和其下游分子cmyc、MMPs、twist、E-cadherin、Vimentin表达水平的变化。结果PEG10干扰效率达65%；转染后肺癌细胞划痕愈合速度变慢；穿过Transwell小室的细胞数减少；克隆形成数目也降低，同时检测到β-catenin及c-myc、MMPs、twist、Vimentin表达水平降低，E-cadherin表达水平升高。结论靶向封闭PEG10基因可下调Wnt/β-catenin信号通路的关键因子β-catenin的表达水平，降低肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移能力，部分逆转肺癌上皮间质转化。

另外，还有研究探讨全反式维甲酸（ATRA）对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR（apelinreceptor）基因表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyltetrazolium，MTT）比色法检测ATRA对体外培养的A549细胞增殖的抑制情况，光学显微镜下观察细胞形态改变，流式细胞术检测细胞周期及凋亡，westernblot检测APLNR蛋白、cyclinD1及p16蛋白的表达情况。结果经ATRA作用后，A549细胞增殖受到明显抑制且抑制程度呈剂量及时间依赖性（P均<0.01）；其细胞形态发生明显变化，细胞周期被阻滞于G₀/G₁期且细胞凋亡率明显升高（P<0.01）；westernblot结果显示，随着ATRA浓度的升高，APLNR蛋白及cyclinD1蛋白的表达水平降低，而p16蛋白的表达水平升高（P均<0.01）。结论ATRA可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡，且能下调APLNR基因的表达。

有研究探讨Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达情况，为肺癌干细胞的基因靶向治疗提供理论依据。方法：应用干细胞无血清培养技术培养A549细胞肿瘤细胞球，采用克隆形成实验检测肺癌肿瘤球细胞增殖能力，流式细胞术检测ABCG2在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况，Westernblotting检测Id1在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况。结果：与贴壁细胞相比，人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞具有较强的克隆能力，且高表达ABCG2，符合肺癌干细胞的特点，Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞中高表达。结论：Id1可能成为靶向肺癌干细胞肺癌治疗的靶点。

主要参考资料

[1] 蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549诱导凋亡作用的研究

[2] PEG10在人肺癌细胞系A549增殖及侵袭迁移过程中的作用

[3] 全反式维甲酸对人肺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR基因表达的影响

[4] Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达