Novex 12%Tris-Glycine Mini Gels,WedgeWellformat,10-well的应用

背景^[1-3]

Novex 12%Tris-Glycine Mini Gels,WedgeWellformat,10-well是浓度12%的十孔聚丙烯酰胺凝胶，可将各种蛋白质重复分离成具有两倍负载能力的良好分辨的条带。Novex Tris-Glycine Mini Gels基于传统的Laemmli蛋白电泳，可以使用Laemmli样品和运行缓冲液。

Novex 12%Tris-Glycine Mini Gels是基于传统Laemmli蛋白电泳系统的聚丙烯酰胺胶，可与Laemmli样品和电泳缓冲液搭配使用。Novex Tris-甘氨酸胶可将一系列蛋白转化成清晰分辨的条带，实现可重复的蛋白分离。

特点^[3-6]

Novex Tris-甘氨酸胶的特点包括：

多样性-用于天然和变性蛋白质测定;

楔形孔-容易加载多达两倍样本量（仅限Mini）;

快速运行条件-在60分钟内使用恒定电压快速分离您的蛋白质;

在4°C下，储存期延长-储存凝胶长达12个月。

Novex Tris-甘氨酸预制胶不含SDS，可用于变性或非变性蛋白的分离。对于变性蛋白，我们推荐使用tris-甘氨酸SDS样品缓冲液以及tris-甘氨酸SDS电泳缓冲液。对于非变性蛋白，我们推荐使用tris-甘氨酸非变性样品缓冲液以及tris-甘氨酸非变性电泳缓冲液。

Novex Tris-甘氨酸预制胶使用含有以下三种离子的tris-甘氨酸非连续缓冲液体系：

氯离子(–)来自凝胶缓冲液，并因其相对于体系中其他阴离子与阳极之间有更强的亲和力而作为前导离子。

甘氨酸(–)，由电泳缓冲液所提供的主要阴离子作为尾随离子，因为其仅带有部分的负电荷，所以在电荷环境下排在具有更高电荷的氯离子后面。

Tris碱基(+)是凝胶和电泳缓冲液中都常见的离子。在电泳过程中，tris-甘氨酸体系中的凝胶和缓冲液离子在凝胶的分离区域形成pH 9.5的运行环境。

应用^[7][8]

用于低血钙症奶牛血浆蛋白组学轮廓分析研究。

奶牛低血钙症是一种以钙代谢负平衡为主的代谢病，常发生于奶牛围产期。它被分为临床型低血钙症即奶牛乳热（Milk Fever），以及亚临床型低血钙症（SubclinicalHypocalcemia）。由于钙稳态调节机制受多种因素影响，以往单纯地只针对某种病因或某种因素的单一研究，无法从整体角度了解其发病机理。应用iTRAQ联合多维液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术筛选和鉴定健康奶牛、乳热奶牛以及亚临床低血钙症奶牛之间的血浆差异表达蛋白，探究这些蛋白在低血钙症发生过程中所起的作用。

方法：实验动物被分为奶牛乳热组（MF）、亚临床低血钙症组（SH）和对照组（C），每组10头奶牛。同组内，每五个奶牛血浆（EDTA抗凝）样品等量混合为一组，去除高丰度蛋白和经胰酶消化为多肽之后用iTRAQ试剂标记。应用多维液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术分离血浆中蛋白质，并应用Proteome Discoverer l.3软件进行定量分析，再结合NCBI数据库搜索，鉴定出差异蛋白。设定1.33和0.75分别作为差异蛋白上调、下调阈值，筛选差异蛋白。最后应用生物信息学技术对差异蛋白进行Network分析、GO分析和Pathway分析。

结果：本实验通过两次生物学重复实验共得到可用于定量分析的重叠蛋白146个，以1.33和0.75作为差异蛋白上调、下调阈值，成功获得差异蛋白42个。生物信息学分析提示这些蛋白主要参与生命活动过程中生物功能、代谢途径、应激反应、信号转导、细胞增殖、酶调节等，其中乳热组差异蛋白22个，12个表达上调，10个表达下调；亚临床低血钙组共有36个差异蛋白，其中29个表达上调，7个表达下调。同时在两个实验组鉴定具有完全相同的变化差异蛋白有15个，主要是与凝血过程、补体激活途径、酶活性调节、炎症反应、激素分泌、应激反应、免疫调节以及骨骼代谢等相关的蛋白。应用iTRAQ标记联合LC-MS/MS技术进行了奶牛低血钙症血浆蛋白组学轮廓分析，共得到146个蛋白，并筛选出符合条件的差异表达蛋白42个。探讨了这些差异表达蛋白与奶牛低血钙症之间的关系，然而它们在奶牛低血钙发病过程中所发挥的作用还有待今后的验证。

参考文献

[1]Diet-induced pseudohypoparathyroidism:A hypocalcemia and milk fever risk factor[J].J.P.Goff,A.Liesegang,R.L.Horst.Journal of Dairy Science.2014(3)

[2]Effect of induced subclinical hypocalcemia on physiological responses and neutrophil function in dairy cows[J].N.Martinez,L.D.P.Sinedino,R.S.Bisinotto,E.S.Ribeiro,G.C.Gomes,F.S.Lima,L.F.Greco,C.A.Risco,K.N.Galv?o,D.Taylor-Rodriguez,J.P.Driver,W.W.Thatcher,J.E.P.Santos.Journal of Dairy Science.2013

[3]Associations of subclinical hypocalcemia at calving with milk yield,and feeding,drinking,and standing behaviors around parturition in Holstein cows[J].P.E.Jawor,J.M.Huzzey,S.J.LeBlanc,M.A.G.von Keyserlingk.Journal of Dairy Science.2012(3)

[4]Complement C3 and cleavage products in cardiometabolic risk[J].Altan Onat,Günay Can,Reza Rezvani,Katherine Cianflone.Clinica Chimica Acta.2011(13)

[5]Prevalence of subclinical hypocalcemia in dairy herds[J].Timothy A.Reinhardt,John D.Lippolis,Brian J.McCluskey,Jesse P.Goff,Ronald L.Horst.The Veterinary Journal.2010(1)

[6]Mass Spectrometry-Based Label-Free Quantitative Proteomics[J].Wenhong Zhu,Jeffrey W.Smith,Chun-Ming Huang,Pieter C.Dorrestein.Journal of Biomedicine and Biotechnology.2009

[7]Gabapentin Receptorα2δ-1 Is a Neuronal Thrombospondin Receptor Responsible for Excitatory CNS Synaptogenesis[J].Cell.2009(2)

[8]王朋贤.基于iTRAQ/LC-MS/MS技术的低血钙症奶牛血浆蛋白组学轮廓分析[D].黑龙江八一农垦大学,2015.