贯叶金丝桃素的应用

背景及概述^[1]

贯叶金丝桃（HypericumperforatumL.）是藤黄科金丝桃属植物。1984年，Suzuki等首次发现贯叶金丝桃具有抗抑郁作用，并且疗效显著、副作用小。随着研究的深入，贯叶金丝桃的抗抑郁、抗病毒、抗肿瘤等作用越来越受到人们的关注。然而，贯叶金丝桃中的活性成分含量较低，并且金丝桃素和贯叶金丝桃素遇光遇热均不稳定，易分解，这些都给活性成分的分离纯化带来了很大困难。

解决这一问题的关键是建立高效、经济、安全的提取纯化方法，不仅可以促进我国贯叶金丝桃资源的深入开发和利用，而且会带来巨大的经济效益。当前国内对贯叶金丝桃的研究多集中在金丝桃素及金丝桃苷上，而对抗抑郁活性极强的贯叶金丝桃素尚未引起足够重视，在制剂标准和提取工艺上忽略了对贯叶金丝桃素的研究。

应用^[2]

贯叶金丝桃素属于间苯三酚类化合物，为贯叶金丝桃的特性成分，分子式为C35H52O4，分子质量为536.793，熔点为79～80℃，不溶于水，易溶于非极性有机溶剂如正己烷、石油醚等。贯叶金丝桃素极不稳定，在光、热和氧气等条件下很容易被氧化，采摘及保存不当都会使之受到损失。在贯叶金丝桃的花和朔果中，贯叶金丝桃素的质量分数为2.0%～4.5%。

目前国际市场对贯叶金丝桃提取物中贯叶金丝桃素的含量要求为，其质量分数不得低于3%。早期研究认为金丝桃素是贯叶金丝桃中主要抗抑郁活性成分，但随着对抗抑郁作用及机制的深入研究，现在大多数研究者认为贯叶金丝桃素能抑制5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)等单胺类神经递质和γ-氨基丁酸(GABA)、L-谷氨酸等氨基酸类神经递质的重吸收，是贯叶金丝桃中发挥抗抑郁作用的主要成分，其作用很可能是通过提高突触体细胞内钠离子浓度或降低突触体内突触小泡的跨膜pH梯度实现的。

另外，贯叶金丝桃的黄酮类成分被认为具有抑制单胺氧化酶(MAO)的作用，金丝桃素被认为具有抑制毒蕈碱乙酰胆碱受体(mAChR)和σ受体等神经受体的作用，而MAO、mAChR和σ受体被认为与抗抑郁作用有关，所以贯叶金丝桃的抗抑郁作用也可能是以贯叶金丝桃素为主要活性成分的多种成分协同作用的结果。研究还发现贯叶金丝桃提取物的抗抑郁作用与贯叶金丝桃素的浓度密切相关，从而进一步证明贯叶金丝桃素是抗抑郁的主要活性物质，但真实的作用机制还需进一步研究探明。

临床研究表明，贯叶金丝桃素制剂的抗抑郁作用明显优于安慰剂，其疗效与标准抗抑郁药马普替林(maprotiline)、丙咪嗪(imipramine)、阿米替林(amitriptyline)相当，但不良反应少得多，治疗费用也相对较低[13]。当前国内对贯叶金丝桃的研究多集中在金丝桃素及金丝桃苷上，而对抗抑郁活性极强的贯叶金丝桃素尚未引起足够重视，在制剂标准和提取工艺上忽略了对贯叶金丝桃素的研究。若能结合中西医理论及大量临床经验，加大对贯叶金丝桃素的开发力度，不仅可填补国内精神病治疗药物的空白，同时还能产生巨大的社会和经济效益。

制备^[1-2]

方法1：叶金丝桃素低温超声提取工艺：称取10g粉碎好的贯叶金丝桃粉末，置500mL烧杯中，按体积比加入10倍量75%乙醇并混匀，加入适量的抗氧化剂，按照各种设定条件超声时间每次10min，提取3次，合并提取液，用氮吹仪挥去乙醇，利用冷冻干燥技术进行干燥，温度-60℃预冻4h，然后按照程序升温曲线的条件下干燥27h，即得贯叶金丝桃素提取物。贯叶金丝桃素对光和热不稳定，因此，在提取等整个工艺中，每一个环节应始终将温度控制在60℃以下且金丝桃素应避光保存于棕色瓶中。

方法2：采用超临界CO2萃取法粗提取贯叶金丝桃素[19]。由于贯叶金丝桃素极性较弱，可以不用夹带剂，在压力为3×107Pa、萃取温度为323K的条件下，所得提取物中贯叶金丝桃素质量分数达2.91%。

分离纯化^[1-2]

贯叶金丝桃素的纯化有3种方法。

(1)薄层色谱法：使用硅胶GF254薄层板，以正己烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂展开，充分洗脱，得到纯度为76.64%的贯叶金丝桃素；再将所得到的贯叶金丝桃素经反相C18柱制备液相色谱分离，甲醇为流动相，进一步纯化，可得纯度大于98%的贯叶金丝桃素。

(2)硅胶柱色谱法：一般采用流动相为正己烷-乙酸乙酯(6∶1)，粗提物经此法分离后可得到纯度为61.14%的贯叶金丝桃素。

(3)高速逆流色谱法：高速逆流色谱(highspeedcountercurrentchromatography，HSCCC)是20世纪80年代发展起来的一种连续、高效的液-液分配色谱技术，结合了液-液萃取和分配色谱内在的优点。分离原理是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相)，随流动相引入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数(K=CSCM)的差别，被依次洗脱，即在流动相中分配比例大的成分先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的成分后被洗脱。

将HSCCC用于天然植物成分的分离有以下优势：①有足够多的溶剂体系可供选择，应用非常广泛；②洗脱方式灵活多样；③由于被分离物质与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高；④可用于天然植物粗提物的去杂，也可用于最后产品的精制，甚至可能将未经任何处理的粗提物一步纯化得到纯品；⑤不需要固体支撑体(即固体固定相)，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等问题。

在实验室在采用HSCCC法提取高纯度天然产物研究方面处于国内领先水平，现正在尝试用此新型分离提取技术纯化贯叶金丝桃活性成分，并已分离得到纯度达98%以上的贯叶金丝桃素纯品，而用此法对金丝桃素、金丝桃苷进行分离纯化的研究也在进行当中。

主要参考资料

[1] 贯叶金丝桃中贯叶金丝桃素提取及含量测定研究

[2] 贯叶金丝桃活性成分及其分离纯化与检测方法的研究进展