探针合成

探针合成是克隆的DNA序列或通过PCR扩增获得的DNA。人工合成的寡核苷酸或从体外转录克隆的DNA序列后获得的RNA，也常作为探针。允许使用互补的配对碱基对靶核酸检测，但所用探针必须是单链。寡核苷酸和RNA探针是自然的单链分子，然而,DNA分子正常情况下是双链。 在对靶序列杂交前，DNA分子必须变为单链，这一般是通过加热使其变性而达到解链目的。解链DNA分子被迅速冷却到只能缓慢复性的温度以下，可使探针保持单链状态。 探针一般用放射性同位素标记,如P32、S35、C14或H3.杂交体发出的射线，能使X光片感光而被观察到，这称为放射自显影。由于放射性物质的使用，对人体有风险，使得非放射性探针有了进一步的发展。常用地高辛(DIG)标记探针，它可被用染料标记或结合有能催化底物并形成有色产物的酶的特异性抗体检测到。 根据核酸分子探针的来源及其性质可分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡核苷酸探针等。